Bradford蛋白浓度测定试剂盒

● 试剂盒内容及保存：

● 储存条件和效期：

考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。试剂盒常温运输；本试剂盒有效期1年。

● 产品简介：

Bradford蛋白质浓度测定试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465 nm变为595 nm，在一定的线性范围内，反应液595 nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595 nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

每个试剂盒可以检测1000个样品（使用微孔板）或60个样品（使用试管）

● 产品特点：

1. 检测速度极快，10个样品只需不足10分钟即可完成。

2. 灵敏度高，检测浓度下限可达25 μg/ml （测定浓度范围在25-1000 μg/ml内有较好的线性关系，最佳测定浓度范围为50-750 μg/ml），最小检测蛋白量可达0.5 μg，待测样品体积为1-20 μl。

3. Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1 M，DTT的浓度可高达5 mM。然而，此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响，故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%，Triton X-100浓度低于0.05%，Tween 20, 60, 80浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（RTP7102）。

● 操作方法

微孔板测定程序：（最优工作范围50-750 μg/ml）

1．  G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；

2．  1 mg/ml蛋白标准品配制：常温完全溶解蛋白标准品，取25 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入100 μl PBS溶液，使其终浓度为1 mg/ml。

3．  按照下表配制BSA标准测定溶液，建议做3个重复：

4．  将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20 μl；

5．  向微孔板中加入200 μl G-250染色液，混匀，室温放置5分钟；

6．  测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

7．  以BSA含量为纵坐标A595读数为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。

试管测定程序：（最优工作范围50-750 μg/ml）

1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；

2. 1mg/ml蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取360 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入1440 μl PBS溶液，使其终浓度为1.0 mg/ml。

3. 按照下表配制BSA标准测定溶液，建议做3个重复：

4. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到200 μl；

5. 向试管中加入3ml G-250染色液，混匀，室温放置3-5分钟；

6. 测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

7. 以BSA含量为纵坐标A595读数为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。

实验示例：